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MMLV逆转录酶图片
产品货号:
BTN60905
中文名称:
MMLV逆转录酶
英文名称:
MMLV Reverse Transcriptase
产品规格:
10000U
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
该酶是突变型的MMLV逆转录DNA聚合酶,从表达莫洛尼氏鼠白血病病毒reverse transcriptase基因(pol基因)的E.coli细胞中分离纯化而得,由一个分子量为76.1KDa的单亚基组成,可催化以单链DNA、RNA或DNA:RNA杂交链为模板的互补DNA链的聚合反应。跟野生型相比,它没有RNase H活性。

产品特点;
1.延伸性能好,可合成长达12.5 Kb的fμLl-length cDNA。
2.最佳反应温度为42℃,但在50℃时仍然有活性,70℃10分钟能使其失活。
3.能以Cy3-,Cy5-,rhodamine-,aminoallyl-,fluorescein等标记的nucleotides 为底物。
4.可用于first strand cDNA 合成,second strand cDNA 合成,DNA labeling,RNA primer extension等。
5.与PCR 兼容,RT产物可以用于PCR和real-time PCR。
6.能被金属螯合剂,无机磷酸,焦磷酸和多胺抑制。
7.没有RNase H活性。

产品组成:
成分规格
MMLV逆转录酶(200U/μL)50μl
5×RT Buffer1ml
说明书1份


储存条件:低温运输,-20℃保存,有限期一年。

使用方法:

一、合成PCR用的1st-strand cDNA
1.按下表配制RT反应体系:
加入物加入量
总RNA
或poly(A)mRNA
或专一的RNA
100-500 ng
10-500 ng
0.01pg-500ng
注:RNA样品不能有基因组DNA污染。
Oligo(dT)18(0.5ug/μL)
或随机引物(0.2ug/μL)
或RNA模板专一性引物
1μL
1μL
15-20pmol
注:随机引物于RNA模板的比例跟最后得到的cDNA的平均长度成反比
RNase-free水补水到12μL

2.70℃保温5分钟后立即冰浴。
3.严格按下表顺序加入各成分:
5×RT Buffer4μL
RNase Inhibitor(20U/μL)1μL
dNTP(10mM each)2μL

4.37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板,可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是25℃(5分钟)。
5.加入1μL(200U)MMLV逆转录酶,反应终体积为20μL。
6.42℃保温60分钟(但如果使用随机引物,需要先25℃保温10分钟,然后再转移到42℃保温60分钟)。
7.70℃保温10分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR模板使用,不需要纯化。

二、合成建文库用的1st-strand cDNA
1.按下表配制RT反应体系:
加入物加入量
poly(A)mRNA
或专一的RNA
1ug
0.5-1ug
注:RNA样品不能有基因组DNA污染。
Oligo(dT)18(0.5ug/μL)
或随机引物(0.2ug/μL)
或RNA模板专一性引物
1μL
1μL
100pmol
注:随机引物于RNA模板的比例跟最后得到的cDNA的平均长度成反比
RNase-free水补水到12μL

2.70℃保温5分钟后立即冰浴。
3.严格按下表顺序加入各成分:
5×RT Buffer4μL
RNase Inhibitor(20U/μL)1μL
dNTP(10mM each)2μL

4.37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板,可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是25℃(5分钟)。
5.加入1μL(200 U)MMLV逆转录酶,反应终体积为20μL。
6.42℃保温60分钟(但如果使用随机引物,需要先25℃保温10分钟,然后再转移到42℃保温60分钟)。
7.70℃保温10分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃。
相关搜索:MMLV逆转录酶MMLV Reverse Transcriptase
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